Микробиологические методы исследования водоемов

Микроорганизмы, обитающие в водной толще, осуществляют процессы минерализации органических веществ, а также взаимопревращения соединений азота, фосфора, железа, марганца и др.

Пробы для микробиологических анализов берут в тех точках и в те же сроки, которые намечены для гидробиологических исследований. Обязательным условием микробиологических анализов является соблюдение стерильности. Поэтому пробу воды отбирают в стерильные бутылки, предварительно вымытые хромовой смесью. Отобранная проба закрывается ватной пробкой с марлевой салфеткой, поверх накладывается салфетка из жесткой бумаги и завязывается ниткой.

Проба воды зачерпывается бутылкой, погружаемой на глубину 5-10 см.
Прямые методы учета микроорганизмов

При прямом микроскопировании воды количество обнаруживаемых микроорганизмов оказывается небольшим. Поэтому для изучения морфологического разнообразия и оценок их общего числа в единице объема можно провести концентрацию пробы. Для этого используют мембранные фильтры с размерами пор 0,35;0,5;0,23;0,3;0,40 мкм. Перед использованием их кипятят в течение 20-30 минут в дистиллированной воде в закрытом сосуде, в котором их и сохраняют.

Для фильтрации воды используют фильтры Зейтца или иной конструкции. Фильтрацию осуществляют под вакуумом. Перед фильтрацией в воду добавляют акридин-оранж (0,4%) из расчета 0,01% в 0,02 м трисбуфере и выдерживают 3 минуты до полного окрашивания. Объем фильтруемой воды может быть от 10 до 20 мл в зависимости от типа водоема. Мембранный фильтр извлекают из фильтрующего аппарата и подсушивают на фильтровальной бумаге под стеклянным колпаком. После этого помещают на каплю иммерсионного масла на предметном стекле. Вторую каплю масла наносят сверху и прикрывают покровным стеклом. Препарат рассматривают в люминесцентном микроскопе.

При использовании МБР или других люминесцентных микроскопов процедура подготовки пробы для счета иная. После отфильтровывания неокрашенной пробы фильтр подсушивают на фильтровальной бумаге на воздухе. Высушенные фильтры окрашивают карболовым эритрозином (5% эритрозин в 5% карболовой кислоты в 100 г воды) в течение 4-24 часов. Для этого в чашку Петри помещают кружок фильтровальной бумаги и увлажняют краской. На нее нижней строной кладут фильтры и закрывают крышкой. После окрашивания фильтры отмывают, перекладывая их на влажную фильтровальную бумагу до тех пор, пока фильтр будет оставлять на бумаге лишь розового цвета. При этом площадь фильтра должна быть розовой, а края бесцветными. Затем фильтр высушивают при комнатной температуре.